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1 产品介绍
瑞楚生物16/10 26/10 DEAE Sepharose FF和EzLoad 16/10 26/10 Q Sepharose FF是将GE DEAE Sepharose FF、Q Sepharose FF、CM Sepharose FF或SP Sepharose FF预装入直径为1.6cm或直径为2.6cm带冷凝价套可耐受5bar压力的层析柱中。
1.1 DEAE Sepharose FF是属于弱阴离子交换填料,其阴离子交换基团为:–O–CH2CH2–N+(C2H5)3H,其特征如下:
特征 | 描述 |
离子交换类型 | 弱阴离子 |
总离子载量 | 0.11-0.16mmol/ml填料 |
排阻极限 | 4×106Da(球蛋白) |
基质 | 6%交联的琼脂糖 |
介质形状 | 45-165μm直径的球体 |
流速 | 300-600cm/h |
载量 | HSA(MW68kDa) 110mg/ml |
工作温度 | 4-40℃ |
pH稳定性 | 2-14(在位清洗),2-12(长期储存) |
化学稳定性 | 几乎兼容所有常见水溶液,1M NaOH,8M 尿素,6M盐酸胍,70%乙醇等 |
不稳定性 | 禁止使用氧化剂,或长期暴露在pH小于4的溶液中 |
1.2 Q Sepharose FF是属于强阴离子交换填料,其阴离子交换基团为:–O–CH2CHOHCH2OCH2CHOHCH2N+(CH3)3,其特征如下:
特征 | 描述 |
离子交换类型 | 强阴离子 |
总离子载量 | 0.18-0.25mmol/ml填料 |
排阻极限 | 4×106Da(球蛋白) |
基质 | 6%交联的琼脂糖 |
介质形状 | 45-165μm直径的球体 |
载量 | HSA(MW68kDa) 120mg/ml |
流速 | 300-600cm/h |
工作温度 | 4-40℃ |
pH稳定性 | 2-14(在位清洗),2-12(长期储存) |
化学稳定性 | 几乎兼容所有常见水溶液,1M NaOH,8M 尿素,6M盐酸胍,70%乙醇等 |
不稳定性 | 禁止使用氧化剂,或长期暴露在pH小于4的溶液中 |
1.3 CM Sepharose FF是属于弱阳离子交换填料,其阳离子交换基团为:–O–CH2COO–,其特征如下:
特征 | 描述 |
离子交换类型 | 弱阳离子 |
总离子载量 | 0.09-0.13mmol/ml填料 |
排阻极限 | 4×106Da(球蛋白) |
基质 | 6%交联的琼脂糖 |
介质形状 | 45-165μm直径的球体 |
载量 | Ribonuclease(MW 13.7 kDa)50mg/ml |
流速 | 300-600cm/h |
工作温度 | 4-40℃ |
pH稳定性 | 2-14(在位清洗),2-12(长期储存) |
化学稳定性 | 几乎兼容所有常见水溶液,1M NaOH,8M 尿素,6M盐酸胍,70%乙醇等 |
不稳定性 | 禁止使用氧化剂,或长期暴露在pH小于4的溶液中 |
1.4 SP Sepharose FF是属于强阳离子交换填料,其阳离子交换基团为:–O–CH2CHOHCH2OCH2CH2CH2SO-3,其特征如下:
特征 | 描述 |
离子交换类型 | 强阳离子 |
总离子载量 | 0.18-0.25mmol/ml填料 |
排阻极限 | 4×106Da(球蛋白) |
基质 | 6%交联的琼脂糖 |
介质形状 | 45-165μm直径的球体 |
载量 | Ribonuclease(MW 13.7 kDa)70mg/ml |
流速 | 300-600cm/h |
工作温度 | 4-40℃ |
pH稳定性 | 2-14(在位清洗),2-12(长期储存) |
化学稳定性 | 几乎兼容所有常见水溶液,1M NaOH,8M 尿素,6M盐酸胍,70%乙醇等 |
不稳定性 | 禁止使用氧化剂,或长期暴露在pH小于4的溶液中 |
2 上样前准备
(1)请小心拿出柱子,用铁架台和柱夹将柱子平稳夹住,保持预装柱垂直竖立;注意加紧,防止预装柱滑落摔碎。
(2)选择合适的转接配件(例如GE Healthcare AKTA, Bio-Rad BioLogic DuoFlow,HPLC系统)将预装柱上端硬管入口与层析系统相连。如果无法选择合适的配件,可以用一根短小的胶管将系统自带的硬管(例如Peek管)与层析柱硬管相连,必要时候用封口膜将管粘合出进行密封。如果无层析系统,操作方法类似,将预装柱上端硬管入口与蠕动泵软管相连。如果蠕动泵软管直径过大,可以采用较小的硬管和较小的胶管进行分级缩小,再与预装柱荧光入口相连。
(3)将上端硬管入口与层析系统相连时注意不要引入气泡。如果拿到预装柱时,您发现预装柱上端硬管内未充满液体,只要预装柱内没有气泡说明柱子完好,否则请联系我们技术人员,必要时返修层析柱。首先用注射器注入20%酒精进上端硬管内,以充满硬管。开启层析系统,设置较高的速度将层析系统入口管道内的空气排除干净,然后设置较低的速度,例如0.1ml/min,让管道内的液体慢慢流出。此时在流动状态下将层析系统与预装柱上端硬管入口相连,注意保证连接时不出现气泡(如果出现气泡则重复操作)。当预装柱与层析系统相连后,迅速打开预装柱下端,然后将下端与层析系统相连。最后恢复层析系统速度至正常速度即可。
3 预装柱使用参数
推荐以下使用参数:
最大运行压力:0.3 MPa,3 bar,42 psi;
最大反压:0.5 Mpa,5bar,73psi;
推荐的线性流速:不大于150cm/h;
清洗溶液:0.5 M NaOH;
再生溶液:1 M NaCl;
储存溶液:20% 乙醇。
4 维护
4.1 在位清洗
带离子吸附蛋白的清洗:反向注入 1-2 柱体积的2M NaCl, 时间为10-15min;
疏水蛋白或脂蛋白的清洗:正向注入1M NaOH ,流速为40cm/h,时间为1-2 h;
脂类或极其疏水的蛋白清洗:注入2-4柱体积的0.5%非离子型表面活性剂(例如Triton X 100,Tween 20等),反向冲洗1-2小时。或者,注入2-4个柱体积的70%乙醇或30%异丙醇,反向冲洗1-2小时。
4.2 消毒
为了去除预装柱内残留的微生物,可以使用0.5-1.0 M NaOH,正向冲洗1h。4.1中的在位清洗也可起到消毒的作用。
4.3 灭菌
如果需要灭菌,必要时候可以拆开预装柱,将预装柱和填料同时灭菌,再重新填装柱子。推荐120度30min为最佳的灭菌条件。
4.4 储存
如果不是用预装柱,请将预装柱放在4-30度的温度条件下储存。禁止在4度以下以及30度以上储存。并且保证管道内冲入20%的乙醇,同时注意密封。冲入20%乙醇是为了防止细菌生长,以保护预装柱卫生。
5 出厂检测
填料:SP Sepharose FF
层析柱:2.6×20cm,柱高:11cm
样品体积:1.0-2.0%柱体积
样品:1.0%(v/v)丙酮水溶液
洗脱剂:水
流速:20–30 cm/h
检测:UV 280 nm
根据UV曲线(或者是电导率曲线)计算柱效,公式如下:
柱效=1/HETP= N/L
N=5.54(VR/Wh)2
VR=保留体积(ml)
Wh=半峰宽(ml)
L=柱高(m)
N=理论塔板数
VR=58.92,Wh=6.53,N=451,柱效=4100
测定图谱:
填料:Q Sepharose FF
层析柱:2.6×20cm,柱高:12cm
样品体积:1.0-2.0%柱体积
样品:1.0%(v/v)丙酮水溶液
洗脱剂:水
流速:20–30 cm/h
检测:UV 280 nm
根据UV曲线(或者是电导率曲线)计算柱效,公式如下:
柱效=1/HETP= N/L
N=5.54(VR/Wh)2
VR=保留体积(ml)
Wh=半峰宽(ml)
L=柱高(m)
N=理论塔板数
VR=54.43,Wh=5.64,N=516,柱效=4300
测定图谱:
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售后服务
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- 检测报出来后,如非人为损坏的,是产品本身质量问题,我公司会及时按您的要求予以退款、换货或维修。
- 如果检测结果是无故障或是人为因素造成的故障,我公司会及时通知您,并咨询您的处理意见。
- 本公司生物资源产品因其可繁殖,客户收到货物拆封后视为已使用,不可退货。我们负责生物资源产品活性,必要时候重新补发。
二、在本公司购买的商品,自购日起(以到货登记为准)15日内出现性能故障,您可以选择换货或修理。(享受15天退换货无需理由的商品,按《15天退换货无需理由细则》办理)
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三、在本公司购买的商品,自购日起(以到货登记为准)一年之内出现非人为损坏的质量问题,本公司承诺免费保修。
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